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如何選擇核酸染料

更新時間:2022-05-27      點擊次數(shù):3145

科研人員還在為如何選擇核酸染料而煩惱嗎?
帶您認(rèn)識幾款優(yōu)秀的核酸染料

一、 李記GelRed,李記GelGreen——李記生物研發(fā)的兩款核酸染料。
據(jù)不*統(tǒng)計,有強烈致癌、致畸作用的EB染料仍以90%的優(yōu)勢占據(jù)核酸染料使用量,在眾多的EB替代染料中,名氣最大的要數(shù)Life公司的SYBR系列、美國Biotium公司的GelRed,GelReen染料,其他替代染料要么是EB,吖啶橙改名,要么是國內(nèi)不成熟的仿品,安全性毫無保障。Life公司的SYBR Green,SYBR Goad, SYBR Safe嚴(yán)格意義上來講,不能稱作安全染料。Biotium公司的GelRed,Gelgreen是一款真正意義上的安全染料,染色效果也好,但價格奇高,做一塊50ml的瓊脂糖凝膠,染料成本接近8元!
2015年,李記生物經(jīng)長期研發(fā),開發(fā)成功國產(chǎn)GelRed,GelGreen染料。這兩款產(chǎn)品全面優(yōu)于SYBR系列染料,在靈敏度、熒光強度、穩(wěn)定性等方面甚至優(yōu)于原創(chuàng)廠家Biotium公司產(chǎn)品(見圖1.),而價格僅為原廠2/3。
 

 
  圖1:I、Hela細(xì)胞與SYBR Green,李記GelRed及李記GelGreen在室溫下孵育一小時,用Olympus熒光顯微鏡觀察并拍照,與SYBR Green孵育的細(xì)胞顯示出綠色熒光,表明染料已透過細(xì)胞膜進入細(xì)胞并與核酸結(jié)合。李記GelRed,李記GelGreen未顯示熒光,說明李記染料未能透過細(xì)胞膜進入細(xì)胞。 II、SYBR Green,李記GelRed及李記GelGreen染料相同DNA濃度下染色效果。
 
產(chǎn)品信息
 
二、HRM專用熒光染料 —— LyGreen
        高分辨率熔解曲線(high-resolution melting,HRM)是一種基于單核苷酸熔解溫度不同而形成不同形態(tài)熔解曲線的基因分析新技術(shù),具有*的敏感性,可以檢測出單個堿基的差異,并且成本低、通量高、速度快、結(jié)果準(zhǔn)確、不受檢測位點的局限,實現(xiàn)了真正的閉管操作。在突變掃描、單核苷酸多態(tài)性分析、甲基化研究、基因分型、序列匹配等方面HRM分析技術(shù)發(fā)揮著重要作用。
        HRM分析的一個必要條件是飽和染料,勝任這一任務(wù)的染料僅有:LC Green,SYTO 9, LyGreen等幾個產(chǎn)品。
        LyGreen™飽和核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結(jié)合飽和熒光染料,是新一代用于HRM分析的熒光染料,也可用于實時定量PCR(qPCR)。該染料結(jié)構(gòu)上由兩個單體染料分子通過一個彈性臂連接成一個二聚體,在沒有dsDNA存在時,該結(jié)構(gòu)呈無熒光環(huán)狀結(jié)構(gòu),一旦有dsDNA出現(xiàn),則恢復(fù)隨機形態(tài)并與dsDNA結(jié)合發(fā)出強烈的綠色熒光。 與其他熒光染料如SYBR Green I 相比,LyGreen具有如下突出優(yōu)點: 1)高靈敏度:在推薦濃度下使用時可以獲得比SYBR Green I 更強的信號。 2)準(zhǔn)確:飽和結(jié)合雙鏈DNA全部小溝位置,變形時染料不遷移,熒光信號準(zhǔn)確反映雙鏈DNA變化情況;過量染料形成二聚體,而不游離,使得LyGreen對PCR的抑制遠(yuǎn)小于SYBR Green I,因此,使用LyGreen進行的qPCR實驗可以使用快速PCR步驟。 3)高穩(wěn)定性:在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里,也可以反復(fù)凍融。 4)安全性好:細(xì)胞膜穿透性測試表明,LyGreen幾乎不能穿透細(xì)胞膜,安全性高。 5)兼容性:和SYBR Green I 光譜相似,使用不同品牌qPCR儀器時不許改變光譜元件設(shè)置,也無需改變操作步驟,qPCR完成后,無需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統(tǒng)下觀察分析。 6)重復(fù)性好(如圖2.):特殊設(shè)計染料,相同反應(yīng)體系下,熒光信號釋放僅與雙鏈濃度有關(guān),線性。
 
2.: LyGreen染料用于綿羊FecB基因HRM分析. HRM分析設(shè)備為LightCycler@480熒光定量PCR儀(德國羅氏)
 
 
產(chǎn)品信息
 
三、PikoGreen——一種極為靈敏的雙鏈DNA定量熒光染料。
       對微量的雙鏈 DNA 進行定量在各種生物學(xué)應(yīng)用中都顯得非常重要,例如 cDNA 文庫的構(gòu)建;用于亞克隆的 DNA 片段的純化;定量 DNA 擴增產(chǎn)物,在藥物中DNA 分子殘留的測定等 。
       Picogreen染料是一種dsDNA定量熒光染料,基本不受ssDNA和RNA的影響,并且可以耐受一定濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白等干擾。目前使用Picogreen染料定量檢測DNA已經(jīng)廣泛用于生物學(xué)檢測,并被2010年版《中華人民共和國藥典》選為藥物殘留DNA定量方法。但是價格貴,貨期長,假貨魚目混珠等在市場上普遍存在。
         PikoGreen是李記生物自主研發(fā)的一款新型dsDNA定量熒光染料,其檢測靈敏度高,可檢測到pg級DNA;檢測范圍寬,可跨越4個數(shù)量級;特異性好。在低檢測限,穩(wěn)定性等方面全面超越PicoGreen, 是PicoGreen的替代產(chǎn)品,價格僅為PicoGreen的1/2. PikoGreen具有如下突出優(yōu)點: 1)靈敏:數(shù)量級較UV吸光讀數(shù)更敏感,可節(jié)省樣品; 2)特異性強:只結(jié)合dsDNA,特異性強,不受樣品常規(guī)污染影響。傳統(tǒng)紫外吸光法容易受樣品中存在的單鏈DNA,蛋白,RNA等影響; 3)耐受性好:耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖,可以直接定量PCR擴增產(chǎn)物而無需從反應(yīng)混合物中純化DNA。 4)線性范圍寬:PikoGreen dsDNA染料測定DNA濃度,在100pg/ml-100ng/ml范圍內(nèi)呈良好線性;熒光計兼容。 5)容易使用:在樣品中加入染料,等待5-6分鐘染色,然后讀數(shù)即可,且適用于96和384孔板;與大多數(shù)基于熒光的酶標(biāo)儀和可適用于各種DNA樣品分析,PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。 6)PikoGreen dsDNA檢測dsDNA的線性關(guān)系良好!(見圖3、圖4、圖5)
 
3.PikoGreen Broad Range dsDNA (Ex/Em 350/460nm)檢測不同類型dsDNA,表現(xiàn)出良好線性關(guān)系。
 
4.分別使用PikoGreen Broad Range dsDNA 和Quant-iT檢測calf thymus DNA,顯示 PikoGreen dsDNA 測得的 DNA 樣本線性關(guān)系更好,且動態(tài)測量范圍更廣
 
5. 用PikoGreen Broad Range dsDNA梯度標(biāo)準(zhǔn)calf thymus DNA溶液所做的線性回歸分析。
 
產(chǎn)品信息
 
 
 
四、李記生物研發(fā)部特別提醒:
  在生物技術(shù)飛速發(fā)展的今天,從事分子生物學(xué)研究的科員人員幾乎每天都與核酸打交道,各種核酸染料也如食品中的味精*。不管我們對安全染料多么有信心,也不管您選擇何種EB替代產(chǎn)品,總之還是奉勸大家牢記----珍愛生命,請帶手套。一時半會兒看不出問題,可年輕的我們,來日方長呢!還有,各種染料染色后的廢棄試劑,請盡可能的規(guī)范處理,請做個負(fù)責(zé)任的實驗人。
 

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