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原代細(xì)胞凍存液的制備、使用與保存

更新時(shí)間:2023-09-18      點(diǎn)擊次數(shù):1182
  原代細(xì)胞凍存液的制備和使用對(duì)于細(xì)胞的保存和復(fù)蘇具有重要意義。以下是制備和使用原代細(xì)胞凍存液的步驟:
 
  制備:
 
  準(zhǔn)備所需試劑和器材,包括DMSO、FBS、培養(yǎng)基、離心管、移液管、細(xì)胞計(jì)數(shù)板、顯微鏡等。
 
  收集細(xì)胞樣品,加入適量培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌。
 
  棄去培養(yǎng)基,加入適量DMSO和FBS混合液進(jìn)行細(xì)胞凍存液的制備。
 
  將細(xì)胞凍存液分裝到凍存管中,每個(gè)凍存管中加入1毫升細(xì)胞凍存液,標(biāo)記好凍存管。
 
  將凍存管放入梯度凍存盒中,然后保存至-80℃過夜(如果沒有凍存盒,可以先在4℃冰箱放置30 min,然后轉(zhuǎn)移至-20℃放置1-2 h,最后轉(zhuǎn)移至-80℃過夜),第二天取出放入液氮罐,并記錄好位置信息。
 
  使用:
 
  準(zhǔn)備所需器材和試劑,包括細(xì)胞凍存液、離心管、移液管、培養(yǎng)基等。
 
  從液氮罐中取出凍存管,迅速放入37℃水浴鍋中進(jìn)行復(fù)蘇。
 
  復(fù)蘇后,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
 
  保存:
 
  在復(fù)蘇后數(shù)小時(shí)內(nèi)將細(xì)胞傳代并培養(yǎng),以便快速擴(kuò)增和存儲(chǔ)。
 
  可以將細(xì)胞保存在常規(guī)培養(yǎng)箱中,但需要注意溫度和濕度的控制。
 
  可以使用細(xì)胞凍存盒將細(xì)胞保存于-80℃冰箱中,以延長(zhǎng)細(xì)胞的存活時(shí)間。
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