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當(dāng)前位置：首頁技術(shù)文章

  • 外泌體是細(xì)胞間通訊的重要媒介

    2024-09-09 外泌體，這個(gè)在細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域中逐漸嶄露頭角的神秘角色，正影響著我們對細(xì)胞通訊和疾病機(jī)制的理解。外泌體是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150nm的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)。它們就像一個(gè)個(gè)精心包裝的小包裹，里面攜帶著多種重要的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等。這些物質(zhì)不僅在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起著關(guān)鍵作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。外泌體存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中1。它們能夠很好地保護(hù)其包被的物質(zhì)，并且能...

  • sirna轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟與轉(zhuǎn)染試劑推薦

    2024-09-06 sirna轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟（以24孔板為例）1．接種細(xì)胞對于貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，將細(xì)胞按照每孔1-2x10^5個(gè)細(xì)胞的量進(jìn)行鋪板，使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度為60%-80%為佳。對于懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前，用PBS清洗細(xì)胞1-2次，用250μLOpti-MEMI減血清培養(yǎng)基(無血清)重懸細(xì)胞，在24孔板中進(jìn)行細(xì)胞鋪板，細(xì)胞密度為60-80%。2．準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑-siRNA復(fù)合物（或轉(zhuǎn)染試劑-miRNA復(fù)合物）(1)對于每孔細(xì)胞，取2μLsiRNA(20μM，DEP...

  • 從實(shí)驗(yàn)室到臨床：無血清細(xì)胞存凍液的轉(zhuǎn)化應(yīng)用之路

    2024-08-26 在生物醫(yī)學(xué)研究和細(xì)胞治療領(lǐng)域，細(xì)胞的長期保存與復(fù)蘇是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的細(xì)胞冷凍保存技術(shù)多依賴于含血清的培養(yǎng)基，但血清來源的不確定性及可能引入的污染，限制了其在某些領(lǐng)域的應(yīng)用。無血清細(xì)胞存凍液作為一種新興的細(xì)胞保存解決方案，為細(xì)胞冷凍保存技術(shù)開辟了新的篇章。本文將深入探討無血清細(xì)胞存凍液的原理、優(yōu)勢及其在細(xì)胞保存領(lǐng)域的重要性。無血清細(xì)胞存凍液是一種專為細(xì)胞冷凍保存設(shè)計(jì)的無血清、無蛋白的保存液。它通常含有細(xì)胞保護(hù)劑，如二甲基亞砜(DMSO)、乙二醇等，這些成分能夠減少細(xì)胞在冷...

  • 李記生物預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)（蛋白Marker的分類與選擇）

    2024-08-23 蛋白Marker即蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，是幾種已知分子量的蛋白質(zhì)的混合物，像“尺子”一樣用來指示蛋白質(zhì)條帶的大小。在WesternBlot實(shí)驗(yàn)中，蛋白Marker主要是用來指示蛋白條帶所對應(yīng)的分子量大小，此外，蛋白Marker還可以用來輔助判斷蛋白轉(zhuǎn)膜是否成功或蛋白在凝膠上的電泳進(jìn)度等作用，所以選擇合適的蛋白Marker也是實(shí)驗(yàn)成功的重要條件之一。李記生物預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)預(yù)染蛋白在不同的緩沖體系下有不同的表觀分子量，以上2個(gè)圖片為兩種緩沖體系下的電泳示意圖。適合作為SDS-PAG...

  • 無血清細(xì)胞凍存液的操作方法

    2024-08-21 無血清細(xì)胞凍存液的操作方法主要包括細(xì)胞的收集、離心、凍存液的加入、分裝、凍存以及后續(xù)的解凍與復(fù)蘇等步驟。以下是詳細(xì)的操作方法：一、細(xì)胞的收集與離心細(xì)胞收集：使用常規(guī)方法收集處于對數(shù)生長期的懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞。對于貼壁細(xì)胞，可以使用胰酶或EDTA等試劑進(jìn)行消化，使其從培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板表面脫落，然后收集到試管或離心管中。細(xì)胞離心：將收集到的細(xì)胞懸浮液置于離心管中，進(jìn)行離心處理以收集細(xì)胞沉淀。離心條件通常為1,0002,000rpm，4℃，持續(xù)35分鐘。注意，離心時(shí)應(yīng)確保溫度適宜，以...

  • 蛋白酶K的酶學(xué)特性及其在生物醫(yī)學(xué)研究中的重要性

    2024-08-17 蛋白酶K，屬于一種廣譜蛋白酶，由白色念珠菌（Candidaantarctica）發(fā)酵產(chǎn)生。它能夠在較寬的pH值范圍內(nèi)（pH4-12）保持活性，且在高溫條件下（65℃）仍能穩(wěn)定工作，這種穩(wěn)定性使蛋白酶K能夠在多種實(shí)驗(yàn)條件下發(fā)揮其作用，成為科研人員手中的得力助手。在分子生物學(xué)領(lǐng)域，蛋白酶K的應(yīng)用尤為廣泛。在DNA提取過程中，蛋白酶K能夠高效地降解細(xì)胞和組織中的蛋白質(zhì)，包括那些與DNA緊密結(jié)合的組蛋白，從而釋放出純凈的DNA，為后續(xù)的PCR擴(kuò)增、測序等實(shí)驗(yàn)提供高質(zhì)量的DNA模板。此...

  • RIPA裂解液介紹與如何選擇

    2024-08-15 提到蛋白提取，大家不約而同會想到RIPA裂解液，裂解液加入樣品中，離心即可完成蛋白的提取。然而RIPA裂解液我們真的用對了嗎？RIPA裂解液是從動物細(xì)胞或組織中提取蛋白的常用裂解液，其工作原理是利用去污劑（表面活性劑）裂解細(xì)胞膜和核膜，從而獲取細(xì)胞和組織中的RIPA可溶性蛋白。RIPA裂解液的選擇RIPA裂解液中主要包含去污劑，緩沖體系，等滲體系，變性劑、穩(wěn)定劑等。其中去污劑是細(xì)胞裂解液中重要成分，是由疏水尾端基團(tuán)和極性親水頭端基團(tuán)組成的兩性分子，它們能夠降低水的表面張力，所...

  • bca法測蛋白濃度原理、實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

    2024-08-15 蛋白質(zhì)濃度測定是用于計(jì)算純化方法的回收率的重要方法。常用的測定方法包括雙縮脲法、Lowry法、紫外吸收法、BCA蛋白濃度檢測法等。其中常用的方法就是BCA法。BCA全稱是BicinchoninicAcidAssay，也叫SmithAssay，這個(gè)方法是由PaulK.Smith發(fā)明的。這個(gè)方法通過展示不同濃度樣品的顏色變化來判斷蛋白的濃度。檢測原理BCA是一種堿性的水溶性復(fù)合物，性質(zhì)穩(wěn)定。在其提供的堿性環(huán)境下，蛋白質(zhì)可以將BCA試劑中的Cu2+還原為Cu+，Cu+繼而與BCA試...
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